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The Journal of Pharmacy & Pharmacognosy Research (JPPRes) is an international, specialized and peer-reviewed open access journal, which publishes studies in the pharmaceutical and herbal fields concerned with the physical, botanical, chemical, biological, toxicological properties and clinical applications of molecular entities, active pharmaceutical ingredients, devices and delivery systems for drugs, vaccines and biologicals, including their design, manufacture, evaluation and marketing. This journal publishes research papers, reviews, commentaries and letters to the editor as well as special issues and review of pre-and post-graduate thesis from pharmacists or professionals involved in Pharmaceutical Sciences or Pharmacognosy.

Standardization and pharmacological evidence of Acid Uric 3x Tablet

J Pharm Pharmacogn Res 8(5): 501-514, 2020.

Original Article

Acid Uric 3× Tablet: Standardization and pharmacological evidence of uric acid use as anti-gout medicine

[Acid Uric 3× Tablet: estandarización y evidencia farmacológica del uso de ácido úrico como medicamento contra la gota]

Ayisha Shaukat*, Khalid Hussain, Nadeem Irfan Bukhari, Naureen Shehzadi

Punjab University College of Pharmacy, University of the Punjab, Allama Iqbal Campus Lahore-54000, Pakistan.
Abstract

Context: Despite being a causative agent of gout, uric acid is used as an anti-gout medicine in homeopathy without reported scientific evidence, and such highly diluted medicines lack the exact amount of active ingredient per dose, which is mandatory for pharmacological evaluation.

Aims: To determine active contents per tablet and evaluate anti-gout and anti-inflammatory activities of Acid Uric 3× Tablet, a homeopathic anti-gout medicine.

Methods: A simple RP-HPLC method was developed and validated for the determination of uric acid in Acid Uric 3× Tablet. The standardized tablet was then investigated for anti-gout activity using xanthine oxidase inhibition and potassium oxonate-induced hyperuricemia in rats models. The tablet was also investigated for anti-inflammatory activity employing both in vitro and in vivo models.

Results: The developed HPLC method was found to be simple, sensitive and precise. Acid Uric 3× Tablet was found to contain 250 µg uric acid/tablet. This medicine inhibited xanthine oxidase activity (IC50 = 12.42 μg/mL) and lowered the serum uric acid in tablet-treated rats (1.02 mg/dL) as compared to toxic group (4.87 mg/dL). The tablet also showed anti-inflammatory activity in heat-induced protein denaturation (IC50 = 4.6 ± 1.0 µg/mL), anti-proteinase (IC50 = 4.64 ± 1.0 µg/mL), heat-induced RBC hemolysis (IC50 = 12.39 ± 1.5 µg/mL) and hypotonicity-induced hemolysis (IC50 = 11.31 ± 1.0 µg/mL). Moreover, significant anti-inflammatory activity was found in the carrageenan-induced rat-paw edema model at a dose of 0.132 mg/kg.

Conclusions: The findings of the study indicate that the developed HPLC method may be used to standardize Acid Uric 3× Tablet and provide scientific evidence of lowering uric acid level.

Keywords: alternative medicine; biological fluids; homeopathy; RP-HPLC; uric acid.

Resumen

Contexto: A pesar de ser un agente causal de la gota, el ácido úrico se usa como un medicamento contra la gota en la homeopatía sin evidencia científica reportada, y tales medicamentos altamente diluidos carecen de la cantidad exacta de ingrediente activo por dosis, lo cual es obligatorio para la evaluación farmacológica.

Objetivos: Determinar los contenidos activos por tableta y evaluar las actividades anti-gota y anti-inflamatorias de Acid Uric 3× Tablet, un medicamento homeopático contra la gota.

Métodos: Se desarrolló y validó un método RP-HPLC simple para la determinación de ácido úrico en Acid Uric 3× Tablet. Luego se investigó la tableta estandarizada para determinar la actividad antigota usando la inhibición de la xantina oxidasa y la hiperuricemia inducida por oxonato de potasio en modelos de ratas. La tableta también se investigó para determinar la actividad anti-inflamatoria empleando modelos in vitro e in vivo.

Resultados: El método HPLC desarrollado fue simple, sensible y preciso. Acid Uric 3× Tablet contenía 250 µg de ácido úrico/tableta. Esta inhibió la actividad de la xantina oxidasa (IC50 = 12,42 μg/mL) y redujo el ácido úrico en suero de ratas tratadas con tabletas (1,02 mg/dL) en comparación con el grupo tóxico (4,87 mg/dL). La tableta también mostró actividad anti-inflamatoria en la desnaturalización de proteínas inducida por calor (IC50 = 4,6 ± 1,0 µg/mL), antiproteinasa (IC50 = 4,64 ± 1,0 µg/mL), hemólisis de glóbulos rojos inducida por calor (IC50 = 12,39 ± 1,5 µg/mL) y hemólisis inducida por hipotonicidad (IC50 = 11,31 ± 1,0 µg/mL). Además, se encontró una actividad anti-inflamatoria significativa en el modelo de edema plantal en rata inducido por carragenano a una dosis de 0,132 mg/kg.

Conclusiones: Los resultados del estudio indican que el método de HPLC desarrollado puede usarse para estandarizar la tableta de ácido úrico y proporcionar evidencia científica de la reducción del nivel de ácido úrico.

Palabras Clave: medicina alternativa; fluidos biológicos; homeopatía; inflammation; RP-HPLC; ácido úrico.

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Citation Format: Shaukat A, Hussain K, Bukhari NI, Shehzadi N (2020) Acid Uric 3× Tablet: Standardization and pharmacological evidence of uric acid use as anti-gout medicine. J Pharm Pharmacogn Res 8(6): 501–514.

© 2020 Journal of Pharmacy & Pharmacognosy Research (JPPRes)

Phenolic-rich green tea extract increases the amoxicillin antibacterial activity

J Pharm Pharmacogn Res 8(5): 491-500, 2020.

Original Article

Phenolic-rich green tea extract increases the antibacterial activity of amoxicillin against Staphylococcus aureus by in vitro and ex vivo studies

[Extracto de té verde rico en fenoles aumenta la actividad antibacteriana de la amoxicilina contra Staphylococcus aureus mediante estudios in vitro y ex vivo]

Sartini Sartini1, M. Natsir Djide1, Muhammad Nur Amir2, Andi Dian Permana3

1Department of Pharmaceutical Microbiology, Faculty of Pharmacy, Hasanuddin University, 90245, Indonesia.
2Department of Biopharmacy Faculty of Pharmacy, Hasanuddin University,90245, Indonesia.
3Department of Pharmaceutical Technology Faculty of Pharmacy, Hasanuddin University,90245, Indonesia.
Abstract

Context: Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) has been a significant challenge in health problems.

Aims: To investigate synergistic properties of green tea extract that can potentially enhance the antibacterial activity of amoxicillin against methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) in vitro and ex vivo.

Methods: Green tea coarse powder was extracted by distilled water using high-pressure extraction. The total of phenolic and tannin contents was determined using spectrophotometry, and epigallocatechin gallate (EGCG) content was analyzed using Ultra-Fast Liquid Chromatography. Minimum Inhibitory Concentration (MIC) against MRSA was determined using a microdilution assay. Antibacterial assay of the combination of the extract and amoxicillin was performed using employing-checkerboard microdilution and agar diffusion assays.

Results: The results exhibited that the green tea extract (GTE) contained total phenolic content of 545.6 ± 4.7 mg GAE/g extract; total tannin content of 356.6 ± 4.1 mg EGCG equivalent /g extract and EGCG of 221.1 ± 11.6 mg/g extract. The MICs combinatorial of GTE and ¼ MIC of amoxicillin was 75 µg/mL. Fractional Inhibitory Concentration Index value was 0.28, indicating that there was a synergy effect between amoxicillin and green tea extract. Essentially, the inhibitory zone diameter obtained by amoxicillin combined with ¼ MIC of GTE was two-fold than the zone produced by only amoxicillin. Although not significant, in ex vivo study, this combination was able to enhance the antibacterial activity of rat’s plasma against MRSA in vivo after the oral administration of GTE and amoxicillin.

Conclusions: The results presented here serve as proof of concept for the enhancement of the antimicrobial activity of synthetic antibiotics when combined with a natural product.

Keywords: amoxicillin; antibacterial; Camelia sinensis; green tea; methicillin-resistant Staphylococcus aureus.

Resumen

Contexto: Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA) ha sido un desafío importante en problemas de salud.

Objetivos: Investigar las propiedades sinérgicas del extracto de té verde que potencialmente pueden mejorar la actividad antibacteriana de la amoxicilina contra Staphylococcus aureus resistente a la meticilina (MRSA) in vitro y ex vivo.

Métodos: El polvo de té verde se extrajo mediante agua destilada usando extracción a alta presión. El total de contenido fenólico y de tanino se determinó mediante espectrofotometría, y el contenido de galato de epigalocatequina (EGCG) se analizó mediante cromatografía líquida ultrarrápida. La concentración inhibitoria mínima (MIC) contra MRSA se determinó usando un ensayo de microdilución. El ensayo antibacteriano de la combinación del extracto y la amoxicilina se realizó utilizando ensayos de microdilución de tablero de ajedrez y difusión de agar.

Resultados: Los resultados mostraron que el extracto de té verde (GTE) tuvo un contenido fenólico total de 545,6 ± 4,7 mg de extracto de GAE/g; contenido total de taninos de 356,6 ± 4,1 mg de equivalente de EGCG/g de extracto y EGCG de 221,1 ± 11,6 mg/g de extracto. La MIC combinatoria de GTE y ¼ MIC de amoxicilina fue de 75 µg/mL. El valor del índice de concentración inhibitoria fraccional fue de 0,28, lo que indica que hubo un efecto de sinergia entre la amoxicilina y el extracto de té verde. Esencialmente, el diámetro de la zona inhibidora obtenida por amoxicilina combinada con ¼ MIC de GTE fue dos veces mayor que la zona producida por solo amoxicilina. Aunque no es significativo, en el estudio ex vivo, esta combinación fue capaz de mejorar la actividad antibacteriana del plasma de rata contra MRSA in vivo después de la administración oral de GTE y amoxicilina.

Conclusiones: Los resultados presentados aquí sirven como prueba de concepto para mejorar la actividad antimicrobiana de los antibióticos sintéticos cuando se combinan con un producto natural.

Palabras Clave: amoxicilina; antibacteriano; Camelia sinensis; té verde; Staphylococcus aureus meticilina resistente.

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Citation Format: Sartini S, Djide MN, Amir MN, Permana AD (2020) Phenolic-rich green tea extract increases the antibacterial activity of amoxicillin against Staphylococcus aureus by in vitro and ex vivo studies. J Pharm Pharmacogn Res 8(6): 491–500.

© 2020 Journal of Pharmacy & Pharmacognosy Research (JPPRes)

GC-MS/antihypertensive evaluations of P. dactylifera L.

J Pharm Pharmacogn Res 8(5): 475-490, 2020.

Original Article

Gas chromatography-mass spectrometry analysis and in vitro inhibitory effects of Phoenix dactylifera L. on key enzymes implicated in hypertension

[Análisis de cromatografía de gases-espectrometría de masas y efectos inhibitorios in vitro de Phoenix dactylifera L. sobre enzimas clave implicadas en la hipertensión]

Okukwe C. Obode1,2, Abiodun H. Adebayo1*, Chunyang Li3

1Department of Biochemistry, College of Science and Technology, Covenant University Ota, Ogun State, Nigeria.
2Nutrition and Toxicology Division, Food Technology Department, Federal Institute of Industrial Research Oshodi, Lagos, Nigeria.
3Institute of Agro-Products Processing, Jiangsu Academy of Agricultural Sciences, Nanjing, Jiangsu, China.
Abstract

Context: Phoenix dactylifera (PD) is a medicinal plant reportedly used in folklore for hypertension management. Scientific validation for its use as an antihypertensive agent is scanty.

Aims: To investigate the bioactive compounds present in extract and differential solvent fractions, and the in vitro inhibitory effect of PD on the activities of key enzymes associated with hypertension.

Methods: Ethanol and differential solvent (ethyl acetate, butanol and water) fractions of PD were prepared using established methods and were thereafter used for the enzyme inhibition assays, which includes: angiotensin-converting enzyme (ACE), acetylcholinesterase (AChE), phosphodiesterase-5 (PDE-5), adenosine deaminase (ADA) and arginase. Gas chromatography-mass spectrometry was used to evaluate bioactive compounds present in the extracts and fractions.

Results: Preliminary phytochemical evaluations revealed the presence of tannins, flavonoids, betacyanins and phenols in all solvent fractions. Some of the compounds detected in P. dactylifera that have been implicated in hypertension management include squalene, lauric acid, palmitic acid, caprate, stearate, vitamin E, β-sitosterol, phytol, linolenic acid, isosorbide, coumarins and taurine. Furthermore, all except the aqueous fraction exerted significantly (p<0.05) higher ACE inhibition than the control drug (lisinopril). Also, the ethanol, butanol, and aqueous fractions exerted significantly (p<0.05) higher inhibition of PDE-5 than the control drug (sildenafil). However, the aqueous fraction exhibited the highest PDE-5 and AChE inhibition at 86.99 ± 0.10 and 91.81 ± 1.20%, respectively. Also, the aqueous fraction had the highest inhibitory effect on ADA (82.87 ± 4.32%).

Conclusions: These findings, therefore, justify the use of P. dactylifera as an antihypertensive agent in the folklore medicine.

Keywords: angiotensin-converting enzyme; arginase; hypertension; Phoenix dactylifera; phosphodiesterase-5; phytochemicals.

Resumen

Contexto: Phoenix dactylifera (PD) es una planta medicinal utilizada en el folklore para el manejo de la hipertensión. La validación científica para su uso como agente antihipertensivo es escasa.

Objetivos: Investigar los compuestos bioactivos presentes en el extracto y las fracciones de solvente diferencial, y el efecto inhibidor in vitro de la PD sobre las actividades de las enzimas clave asociadas con la hipertensión.

Métodos: Las fracciones de etanol y disolvente diferencial (acetato de etilo, butanol y agua) de PD se prepararon utilizando métodos establecidos y posteriormente se usaron para los ensayos de inhibición enzimática que incluyeron: enzima convertidora de angiotensina (ACE), acetilcolinesterasa (AChE), fosfodiesterasa-5 (PDE-5), adenosina desaminasa (ADA) y arginasa. La cromatografía de gases-espectrometría de masas se utilizó para evaluar los compuestos bioactivos presentes en los extractos y fracciones.

Resultados: Las evaluaciones fitoquímicas preliminares revelaron la presencia de taninos, flavonoides, betacianinas y fenoles en todas las fracciones de solventes. Algunos de los compuestos detectados en P. dactylifera que han sido implicados en el manejo de la hipertensión incluyen escualeno, ácido láurico, ácido palmítico, caprato, estearato, vitamina E, β-sitosterol, fitol, ácido linolénico, isosorbida, cumarinas y taurina. Además, todos excepto la fracción acuosa ejerció una inhibición de la ECA significativamente mayor (p<0.05) que el fármaco de control (lisinopril). Además, las fracciones etanólica, butanólica y acuosa ejercieron una inhibición significativamente mayor (p<0.05) sobre PDE-5 que el fármaco control (sildenafil). Sin embargo, la fracción acuosa exhibió la inhibición más alta de PDE-5 y AChE a 86.99 ± 0.10 y 91.81 ± 1.20%, respectivamente. Además, la fracción acuosa tuvo el mayor efecto inhibidor sobre ADA (82.87 ± 4.32%).

Conclusiones: Estos hallazgos, por lo tanto, justifican el uso de P. dactylifera como agente antihipertensivo en la medicina popular.

Palabras Clave: arginasa; enzima convertidora de angiotensina; fitoquímicos; fosfodiesterasa-5; hipertensión; Phoenix dactylifera.

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Citation Format: Obode OC, Adebayo AH, Li C (2020) Gas chromatography-mass spectrometry analysis and in vitro inhibitory effects of Phoenix dactylifera L. on key enzymes implicated in hypertension. J Pharm Pharmacogn Res 8(5): 475–490.

© 2020 Journal of Pharmacy & Pharmacognosy Research (JPPRes)

Cytotoxic saponins of Chamaecostus subsessilis

J Pharm Pharmacogn Res 8(5): 466-474, 2020.

Original Article

Saponins from the rhizomes of Chamaecostus subsessilis and their cytotoxic activity against HL60 human promyelocytic leukemia cells

[Saponinas de los rizomas de Chamaecostus subsessilis y su actividad citotóxica contra las células de leucemia promielocítica humana HL60]

Ezequias Pessoa de Siqueira1, Ana Carolina Soares Braga1, Fernando Galligani2, Elaine Maria de Souza-Fagundes2, Betania Barros Cota1*

1Laboratory of Chemistry of Bioactive Natural Products, Rene Rachou Institute, Oswaldo Cruz Fundation, Belo Horizonte, 30.190-009, Brazil.
2Department of Physiology and Biophysics, Federal University of Minas Gerais, Belo Horizonte, Minas Gerais, 31270901, Brazil.
Abstract

Context: Species of the Costaceae family have been traditionally used for the treatment of infections, tumors and inflammatory diseases. Chamaecostus subsessilis (Nees & Mart.) C. D. Specht & D.W. Stev. (Costaceae) is a native medicinal plant with distribution in the Cerrado forest ecosystem of Central Brazil. In our previous work, the antitumor potential of the chloroform fraction (CHCl3 Fr) from rhizomes ethanol extract (REEX) of C. subsessilis was determined against a series of tumor cell lines (HL60, Jurkat, MDA-MB231, MCF-7, HTC-116 and THP-1) using 3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) colorimetric assay.

Aims: To isolate and identify the cytotoxic compounds present in CHCl3 Fr from REEX of C. subsessilis.

Methods: The bio-guided chromatographic fractionation of the CHCl3 Fr was performed by High-Performance Liquid Chromatography (HPLC) and preparative Thin Layer Chromatography (prep-TLC). The cytotoxicity of the isolated compounds was evaluated against human promyelocytic leukemia cells (HL60) and human embryonic renal non-tumor cell lineage (HEK-293) by MTT assay.

Results: Dioscin and gracillin were identified as active compounds from CHCl3 Fr from REEX of C. subsessilis. They showed IC50 values of 5.3 µM and 14.0 µM, respectively, against HL60 cells, but they did not demonstrate selectivity compared to HEK-293 cells.

Conclusions: These results corroborate with the popular use of species of the Costaceae family as a source of antitumor agents. To the best of our knowledge, this is the first time that these saponins are isolated from this species.

Keywords: Chamaecostus subsessilis; Costaceae; cytotoxic activity; saponins; tumor cell line.

Resumen

Contexto: Las especies de la familia Costaceae se han utilizado tradicionalmente para el tratamiento de infecciones, tumores y enfermedades inflamatorias. Chamaecostus subsessilis (Nees y Mart.) C. D. Specht y D.W. Stev. (Costaceae) es una planta medicinal nativa con distribución en el ecosistema forestal Cerrado del centro de Brasil. En nuestro trabajo anterior, el potencial antitumoral de la fracción de cloroformo (CHCl3 Fr) del extracto de etanol de rizomas (REEX) de C. subsessilis se determinó frente a una serie de líneas celulares tumorales (HL60, Jurkat, MDA-MB231, MCF-7, HTC -116 y THP-1) utilizando el ensayo colorimétrico baseado en bromuro de 3-(4, 5-dimetiltiazol-2-il) -2, 5-difeniltetrazolio (MTT).

Objetivos: Aislar e identificar los compuestos citotóxicos presentes en CHCl3 Fr de REEX de C. subsessilis.

Métodos: El fraccionamiento cromatográfico bioguiado del CHCl3 Fr se realizó mediante cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) y cromatografía preparativa de capa fina (prep-CCF). La citotoxicidad de los compuestos aislados se evaluó frente a las células de leucemia promielocítica humana (HL60) y el linaje de células no tumorales renales embrionarias humanas (HEK-293) mediante el ensayo MTT.

Resultados: Dioscina y gracillin se identificaron como compuestos activos de CHCl3 Fr de REEX de C. subsessilis. Ellos mostraron valores de CI50 de 5,3 µM y 14,0 µM, respectivamente, contra células HL60, pero no demostraron selectividad en comparación con las células HEK-293.

Conclusiones: Estos resultados corroboran con el uso popular de especies de la familia Costaceae como fuente de agentes antitumorales. Hasta donde sabemos, esta es la primera vez que estas saponinas se aíslan de esta especie.

Palabras Clave: actividad citotóxica; Chamaecostus subsessilis; Costaceae; línea celular tumoral; saponinas.

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Citation Format: Siqueira EP, Galligani F, Braga ACS, Souza-Fagundes EM, Cota BB (2020) Saponins from the rhizomes of Chamaecostus subsessilis and their cytotoxic activity against HL60 human promyelocytic leukemia cells. J Pharm Pharmacogn Res 8(5): 466–474.

© 2020 Journal of Pharmacy & Pharmacognosy Research (JPPRes)

Immunomodulator effect of Parkia speciosa

J Pharm Pharmacogn Res 8(5): 457-465, 2020.

Original Article

Immunomodulatory effect of Parkia speciosa Hassk. pods extract on rat induced by Salmonella typhimurium

[Efecto inmunomodulador del extracto de vainas de Parkia speciosa Hassk. en ratas inducidas por Salmonella typhimurium]

Fitrya Fitrya1*, Annisa Amriani1, Rennie Puspa Novita1, Elfita2, Dewi Setiorini1

1Pharmacy Department, Sriwijaya University, Palembang, Indonesia.
2Chemistry Department, Sriwijaya University, Palembang, Indonesia.
Abstract

Context: Parkia speciosa, which has phenolic compounds and pharmacology activities, is a plant having potential immunomodulatory agents from the extract of its pod.

Aims: To evaluate the potential of P. speciosa as an immunomodulatory agent tested on albino rats induced by the bacteria Salmonella typhimurium leading to typhoid fever.

Methods: The animals were divided into six groups: normal non-infected group, negative control group, positive control, and three test groups with doses of 200, 400 and 800 mg/kg BW. The test groups were treated by the extract for 12 days. The control and test groups were induced with the S. typhimurium on the 8th day. On day 12th, CD4+, total leukocytes, differential cell count, and histology of the spleen organ were evaluated. Statistical analysis was performed by using one-way ANOVA followed post hoc LSD test (α 0.05).

Results: The result showed that the ethanol extract of P. speciosa pod could increase the number of CD4+. The extract to 200 and 400 mg/kg BW doses increased in the parameters of leukocyte, neutrophil, lymphocyte and monocyte with insignificant differences compared to that of the positive control group (p>0.05). However, there were significant differences between the two first parameters between the test group with 800 mg/kg BW doses compared to the positive control group. Moreover, more necroses in the spleen were observed from histological analysis on 800 mg/kg BW doses than 400 mg/kg BW.

Conclusions: In general, P. speciosa ethanolic extract can increase the immune system based on the CD4+ count, leukocyte, monocyte, and neutrophil, and causes normal necroses in low doses.

Keywords: Parkia speciosa; immunomodulator; Salmonella typhimurium; typhoid fever.

Resumen

Contexto: Parkia speciosa, que tiene compuestos fenólicos y actividades farmacológicas, es una planta que tiene agentes inmunomoduladores potenciales del extracto de su vaina.

Objetivos: Evaluar el potencial de P. speciosa como agente inmunomodulador en ratas albinas inducidas por la bacteria Salmonella typhimurium que conduce a la fiebre tifoidea.

Métodos: Los animales se dividieron en seis grupos: grupo normal no infectado, grupo de control negativo, control positivo y tres grupos de prueba con dosis de 200, 400 y 800 mg/kg de peso corporal. Los grupos de prueba fueron tratados con el extracto durante 12 días. El control y los grupos de prueba fueron inducidos con S. typhimurium en el octavo día. El día 12, se evaluaron los CD4+, los leucocitos totales, el recuento diferencial de células y la histología del órgano del bazo. El análisis estadístico se realizó mediante el uso de ANOVA unidireccional seguido de la prueba post hoc LSD (α 0,05).

Resultados: El extracto etanólico de la vaina de P. speciosa podría aumentar el número de CD4+. El extracto a dosis de 200 y 400 mg/kg de peso corporal aumentó en los parámetros de leucocitos, neutrófilos, linfocitos y monocitos con diferencias insignificantes en comparación con el grupo de control positivo (p>0,05). Sin embargo, hubo diferencias significativas entre los dos primeros parámetros entre el grupo de prueba con dosis de 800 mg kg de peso corporal en comparación con el grupo de control positivo. Además, se observaron más necrosis en el bazo a partir del análisis histológico con dosis de 800 mg/kg de peso corporal que con 400 mg/kg de peso corporal.

Conclusiones: En general, el extracto etanólico de P. speciosa puede aumentar el sistema inmunitario en función del recuento de CD4+, leucocitos, monocitos y neutrófilos, y causa necrosis normales en dosis bajas.

Palabras Clave: Parkia speciosa; inmunomodulador; Salmonella typhimurium; fiebre tifoidea.

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Citation Format: Fitrya F, Amriani A, Novita RP, Elfita, Setiorini D (2020) Immunomodulatory effect of Parkia speciosa Hassk. pods extract on rat induced by Salmonella typhimurium. J Pharm Pharmacogn Res 8(5): 457–465.

© 2020 Journal of Pharmacy & Pharmacognosy Research (JPPRes)

Catechin in avocado seed as a skin lightening agent

J Pharm Pharmacogn Res 8(5): 449-456, 2020.

Original Article

The activity of avocado (Persea americana Mill.) seed extract containing catechin as a skin lightening agent

[Actividad del extracto de semilla de aguacate (Persea americana Mill.) conteniendo catequina como agente aclarante de la piel]

Ni Putu Linda Laksmiani*, I Komang N. Sanjaya, Ni Putu E. Leliqia

Department of Pharmacy, Mathematics and Natural Science Faculty, Udayana University, Indonesia.
Abstract

Context: Indonesia is a tropical country with high UV rays. UV rays can increase melanin synthesis in the skin and cause the skin to become darker and hyperpigmented. One way to overcome this problem is the use of skin lightening agents through the mechanism of tyrosinase inhibition. Flavonoids have antioxidant activity and inhibit the process of melanogenesis.  Also, avocado seeds contain secondary metabolites of flavonoids in the form of catechin.

Aims: To determine the potential and activity of catechin as skin lightening agent against the target protein, tyrosinase, by in silico test using molecular docking method and in vitro test compared to kojic acid.

Methods: In silico assay was carry out using a computational method with autodock 4.2 program to demonstrate the affinity of active compound (catechin) with tyrosinase as the target protein by evaluating the binding energy value. Inhibition of tyrosinase is one way to inhibit the formation of melanin, so the skin becomes brighter. Spectrophotometry method was conducted to measure the absorbance of dopachrome and calculate the percentage of tyrosinase inhibition to be altered as IC50.

Results: The energy values ​​of catechin and kojic acid in tyrosinase enzymes were -7.64 kcal/mol and -5.03 kcal/mol, respectively. The energy value of the catechin bond was smaller than kojic acid in the tyrosinase. The bond energy value showed that catechin had greater potential than kojic acid as a skin lightening agent by inhibiting tyrosinase in silico using the molecular docking method. The IC50 value from ethyl acetate extract of avocado seeds disrupt the tyrosinase using the in vitro test was 93.02 ± 1.98 mg/mL, while IC50 kojic acid was 48.67 ± 0.1 mg/mL.

Conclusions: Avocado seeds extract containing catechin has a potential activity as a lightening agent by inhibiting the tyrosinase. Further research must be done to fractionation the extract to get a significant effect.

Keywords: avocado seed; in silico; in vitro; tyrosinase inhibitor.

Resumen

Contexto: Indonesia es un país tropical con altos rayos UV. Los rayos UV pueden aumentar la síntesis de melanina en la piel y hacer que la piel se vuelva más oscura e hiperpigmentada. Una forma de superar este problema es el uso de agentes para aclarar la piel a través del mecanismo de inhibición de la tirosinasa. Los flavonoides tienen actividad antioxidante e inhiben el proceso de melanogénesis. Además, las semillas de aguacate contienen metabolitos secundarios de flavonoides en forma de catequina.

Objetivos: Determinar el potencial y la actividad de la catequina como agente para aclarar la piel contra la proteína objetivo, tirosinasa, mediante prueba in silico utilizando el método de acoplamiento molecular y la prueba in vitro en comparación con el ácido kójico.

Métodos: El ensayo in silico se llevó a cabo utilizando un método computacional con el programa Autodock 4.2 para demostrar la afinidad del compuesto activo (catequina) con la tirosinasa como la proteína diana mediante la evaluación del valor de energía de unión. La inhibición de la tirosinasa es una forma de inhibir la formación de melanina, por lo que la piel se vuelve más brillante. El método de espectrofotometría se realizó para medir la absorbancia del dopacromo y calcular el porcentaje de inhibición de la tirosinasa que se alterará como IC50.

Resultados: Los valores de energía de catequina y ácido kójico en las enzimas tirosinasa fueron -7,64 kcal/mol y -5,03 kcal/mol, respectivamente. El valor energético del enlace de catequina fue menor que el ácido kójico en la tirosinasa. El valor de la energía de enlace mostró que la catequina tuvo un mayor potencial que el ácido kójico como agente para aclarar la piel al inhibir la tirosinasa in silico utilizando el método de acoplamiento molecular. El valor IC50 del extracto de acetato de etilo de las semillas de aguacate alteró la tirosinasa usando la prueba in vitro que fue 93,02 ± 1,98 mg/mL, mientras que para el ácido kójico fue 48,67 ± 0,1 mg/mL.

Conclusiones: El extracto de semillas de aguacate que contiene catequina tiene una actividad potencial como agente aclarante al inhibir la tirosinasa. Se deben realizar más investigaciones para fraccionar el extracto para obtener un efecto significativo.

Palabras Clave: in silico; in vitro; semilla de aguacate; tirosinasa inhibidor.

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Citation Format: Laksmiani NPLL, Sanjaya IKN, Leliqia NPE (2020) The activity of avocado (Persea americana Mill.) seed  extract containing catechin as a skin lightening agent. J Pharm Pharmacogn Res 8(5): 449–456.

© 2020 Journal of Pharmacy & Pharmacognosy Research (JPPRes)

Nephroprotection of Cupressus macrocarpa and Dioon edule

J Pharm Pharmacogn Res 8(5): 434-448, 2020.

Original Article

Protective effect of Cupressus macrocarpa and Dioon edule against gentamicin-induced nephrotoxicity in rats

[Efecto protector de Cupressus macrocarpa y Dioon edule contra la nefrotoxicidad inducida por gentamicina en ratas]

Ghada Mohammad Al-Ashmawy1, Suzy Abd El-Hakeem El-Sherbeni2*

1Biochemistry Department, Faculty of Pharmacy, Tanta University. El-Gharbia, Tanta 31527, Egypt.
2Pharmacognosy Department, Faculty of Pharmacy, Tanta University. El-Gharbia, Tanta 31527, Egypt.
Abstract

Context: It has been reported that Cupressus macrocarpa Hartw. ex Gordon (Cupressaceae) and Dioon edule Lindl. (Zamiaceae) contain compounds with antioxidant and anti-inflammatory effects; therefore, they may exert a nephroprotective effect.

Aims: To explore the renoprotective effect of C. macrocarpa and D. edule and the underlying molecular mechanisms.

Methods: Ten male Wister rats were used for each group of control (1% CMC in saline), gentamicin (GM, 40 mg/kg), D. edule leaves methanol extract (DLM), C. macrocarpa leaves combined petroleum ether and methanol extract (CLEM) and C. macrocarpa roots methanol extract (CRM). Rats were orally administered the extracts (250 mg/kg) daily concomitantly for 9 days with GM. Evaluation of kidney function, histopathology and measuring renal AMPK-α1, NF-κB and iNOS genes expression were carried out. There were no symptoms of systemic adverse effects in any treated group.

Results: Blood urea nitrogen (mg/dL) was significantly reduced by CLEM (24.0 ± 1.205) and CRM (22.889 ± 1.250). Creatinine (mg/dL) was significantly decreased by CLEM (0.59 ± 0.022) and CRM (0.580 ± 0.029). Gene expression of AMPK-α1 enhanced by CLEM (16.717 ± 0.430), CRM (19.18 ± 0.871), DLM (0.417 ± 0.020). iNOS was downregulated by CLEM (0.9 ± 0.056), CRM (1.53 ± 0.044), and DLM (1.642 ± 0.050). NF-κB was decreased by CLEM (1.148 ± 0.076), CRM (0.918 ± 0.065), and DLM (1.783 ± 0.071). CRM and CLEM exhibited normal to mild renal degeneration and mild to moderate expression of iNOS.

Conclusions: C. macrocarpa extracts exhibited significant renoprotective effect and could be considered as a new promising strategy against renal complications.

Keywords: AMPK-α1; blood urea nitrogen; creatinine; iNOS; NF-κB.

Resumen

Contexto: Se ha informado que Cupressus macrocarpa Hartw. ex Gordon (Cupressaceae) y Dioon edule Lindl. (Zamiaceae) contienen compuestos con efectos antioxidantes y antiinflamatorios; por lo tanto, pueden ejercer un efecto nefroprotector.

Objetivos: Explorar el efecto renoprotector de C. macrocarpa y D. edule y los mecanismos moleculares subyacentes.

Métodos: Se utilizaron diez ratas Wister macho para cada grupo de control (1% de CMC en solución salina), gentamicina (GM, 40 mg / kg), extracto metanólico de hojas de D. edule (DLM), extracto combinado de éter de petróleo y metanol de hojas de C. macrocarpa (CLEM) y extracto metanólico de raíces de C. macrocarpa (CRM). A las ratas se les administraron por vía oral los extractos (250 mg/kg) diariamente, de forma concomitante con GM, durante 9 días. Se evaluaron función renal, histopatología y medición de la expresión de genes AMPK-α1, NF-κB e iNOS renales. No hubo síntomas de efectos adversos sistémicos en ningún grupo tratado.

Resultados: El nitrógeno ureico en sangre (mg/dL) se redujo significativamente por CLEM (24,0 ± 1,205) y CRM (22,889 ± 1,250). La creatinina (mg/dL) disminuyó significativamente en CLEM (0,59 ± 0,022) y CRM (0,580 ± 0,029). Expresión génica de AMPK-α1 aumentó para CLEM (16,717 ± 0,430), CRM (19,18 ± 0,871) y DLM (0,417 ± 0,020). iNOS fue regulado negativamente por CLEM (0,9 ± 0,056), CRM (1,53 ± 0,044) y DLM (1,642 ± 0,050). NF-κB se redujo en CLEM (1,148 ± 0,076), CRM (0,918 ± 0,065) y DLM (1,783 ± 0,071). CRM y CLEM exhibieron degeneración renal normal a leve y una expresión leve a moderada de iNOS.

Conclusiones: Los extractos de C. macrocarpa exhibieron un efecto renoprotector significativo y podrían considerarse como una nueva estrategia prometedora contra las complicaciones renales.

Palabras Clave: AMPK-α1; creatinine; iNOS; NF-κB; nitrógeno ureico sanguíneo.

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Citation Format: Al-Ashmawy GM, El-Sherbeni SA (2020) Protective effect of Cupressus macrocarpa and Dioon edule against gentamicin-induced nephrotoxicity in rats. J Pharm Pharmacogn Res 8(5): 434–448.

© 2020 Journal of Pharmacy & Pharmacognosy Research (JPPRes)

Metal bioaccesibility from Spirulina supplements

J Pharm Pharmacogn Res 8(5): 422-433, 2020.

Original Article

Bioaccessibility studies of Fe, Cu and Zn from Spirulina dietary supplements with different excipient composition and dosage form

[Estudios de bioaccesibilidad de Fe, Cu y Zn de suplementos dietarios de espirulina con diferente composición de excipiente y forma de dosificación]

María V. Principe1,2, Isis S. Permigiani1, María C. Della Vedova1, Elisa Petenatti2,3, Pablo Pacheco1*, Raúl A. Gil1

1Laboratorio de Espectrometría de Masas – Instituto de Química de San Luis (CCT-San Luis) – Universidad Nacional de San Luis. Av. Ejército de los Andes 950, Ciudad de San Luis (5700). Argentina.
2Área de Farmacognosia, Departamento de Farmacia, Facultad de Química, Bioquímica y Farmacia – Universidad Nacional de San Luis. Av. Ejército de los Andes 950, Ciudad de San Luis (5700). Argentina.
3Instituto Multidisciplinario de Investigaciones Biológicas – IMIBIO – Av. Ejército de los Andes 950, Ciudad de San Luis (5700). Argentina.
Abstract

Context: The cyanobacteria Spirulina is a food supplement according to its high nutritional value. However, the bioaccesibility (Bac) of nutrients like Fe, Cu and Zn from Spirulina can be affected by excipients and formulations of supplements.

Aims: To evaluate the Bac of Fe, Cu and Zn from different commercial presentations of Spirulina-based dietary supplements according to excipients and formulations.

Methods: Microscopic studies were performed to study Spirulina content in dietary supplements. Total Fe, Cu and Zn concentrations were determined by Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry (ICP-MS). Bac was calculated as the ratio between total metal concentration and the metal concentration after in vitro gastrointestinal digestion.

Results: The Spirulina fragments concentration in the analyzed dietary supplements were different, corresponding to 2.21 × 109 – 4.46 × 109 cell fragments/g (p = 0.021; 95% confidence).  Fe, Cu and Zn concentrations in Spirulina dietary supplements ranged from 63 ± 1 – 1066 ± 7 µg/g, 1.8 ± 0.1 – 187.9 ± 1.9 µg/g and 3.0 ± 0.3 – 57.3 ± 0.6 µg/g, respectively. Fe, Cu and Zn Bac were higher in the intestinal digestion stage in samples with high Spirulina count. Fe Bac was lower in tablets. Cu Bac was higher in the oral phase rather than the intestinal phase when Cu is present in excipients and not in Spirulina. Zn Bac decreases when Mg stearate is introduced as an excipient.

Conclusions: The Bac of Fe, Cu, and Zn from Spirulina dietary supplements showed to be affected by excipients composition and by the solid dosage form. The different commercial presentations of Spirulina affect their nutritional value.

Keywords: bioaccessibility; dietary supplements; excipients; metal accumulation; ICP-DRC-MS; in vitro digestion; Spirulina.

Resumen

Contexto: La cianobacteria espirulina es un complemento alimenticio según su alto valor nutricional. Sin embargo, la bioaccesibilidad (Bac) de nutrientes como Fe, Cu y Zn de la espirulina puede verse afectada por los excipientes y las formulaciones de suplementos.

Objetivos: Evaluar la Bac de Fe, Cu y Zn de diferentes presentaciones comerciales de suplementos dietéticos basados en espirulina de acuerdo con excipientes y formulaciones.

Métodos: Se realizaron estudios microscópicos para estudiar el contenido de espirulina en suplementos dietéticos. Las concentraciones totales de Fe, Cu y Zn se determinaron por espectrometría de masas de plasma acoplado inductivamente (ICP-MS). Bac se calculó como la relación entre la concentración de metal total y la concentración de metal después de la digestión gastrointestinal in vitro.

Resultados: La concentración de fragmentos de espirulina en los suplementos dietéticos analizados fue diferente, correspondiendo a 2.21 × 109 – 4.46 × 109 fragmentos de células/g (p = 0.021; 95% de confianza). Las concentraciones de Fe, Cu y Zn en los suplementos dietéticos de espirulina variaron entre 63 ± 1 – 1066 ± 7 µg/g, 1.8 ± 0.1 – 187.9 ± 1.9 µg/g y 3.0 ± 0.3 – 57.3 ± 0.6 µg/g, respectivamente. Bac de Fe, Cu y Zn fueron mayores en la etapa de digestión intestinal en muestras con un alto recuento de espirulina. Bac de Fe fue menor en tabletas. Bac de Cu fue mayor en la fase oral que en la fase intestinal cuando Cu está presente en los excipientes y no en la espirulina. Bac de Zn disminuye cuando se introduce estearato de Mg como excipiente.

Conclusiones: La Bac de Fe, Cu y Zn de los suplementos dietéticos de espirulina se vio afectado por la composición de los excipientes y por la forma de dosificación sólida. Las diferentes presentaciones comerciales de espirulina afectan su valor nutricional.

Palabras Clave: acumulación de metales; bioaccesibilidad; digestión in vitro; espirulina; excipientes; ICP-DRC-MS; suplementos dietarios.

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Citation Format: Principe MV, Permigiani IS, Della Vedova MC, Petenatti E, Pacheco P, Gil RA (2020) Bioaccessibility studies of Fe, Cu and Zn from Spirulina dietary supplements with different excipient composition and dosage form. J Pharm Pharmacogn Res 8(5): 422–433.

© 2020 Journal of Pharmacy & Pharmacognosy Research (JPPRes)

Kombucha from Rhizophora mucronata

J Pharm Pharmacogn Res 8(5): 410-421, 2020.

Original Article

The kombucha from Rhizophora mucronata Lam. herbal tea: Characteristics and the potential as an antidiabetic beverage

[Kombucha del té de hierbas de Rhizophora mucronata: Características y potencial como bebida antidiabética]

Hardoko*, Evi K. Harisman, Yunita E. Puspitasari

Department of Fisheries and Product Technology, Faculty of Fisheries and Marine Science, Brawijaya University, Jalan Veteran No. 1, Malang 65145, East Java, Indonesia.
Abstract

Context: Kombucha from tea is reported to be beneficial for health. Moreover, it can be used as a hepatoprotective, antiproliferative, antimicrobial, antidiabetic, and antilipidemic agent and is capable of healing stomach ulcers. But kombucha from other herbal has not been studied, including kombucha from the mangrove (Rhizophora mucronata) fruit.

Aims: To evaluate the characteristics and the antidiabetic potential of kombucha herbal tea from R. mucronata fruit based on in vitro, chemistry, and physical analysis.

Methods: This study was conducted by an experimental method using R. mucronata herbal tea as a kombucha drink with different sugar concentrations (10, 20, 30%) and fermentation time (7, 14, 21 days) with three replications on each experiment. The analyzed parameters were the inhibition of the α-glucosidase enzyme for antidiabetic activity, total phenolics, total acids, and organoleptic characteristics.

Results: The sugar concentration and fermentation time significantly affected the characteristics of the produced kombucha in inhibiting α-glucosidase. The optimum treatment in inhibition was at 10% sugar concentration and 14 days of fermentation time with IC50 of 33.95 ppm. The kombucha from R. mucronata fruit had a pH of 3.11 and contained a total phenolics of 19,679.82 mg GAE/100g, 0.52% of total acids, and was quite preferred by panelists.

Conclusions: Kombucha herbal tea of R. mucronata fruit has the potential as an antidiabetic drink with a lower IC50 value than acarbose drug and commercial kombucha tea.

Keywords: antidiabetic; fruit; a-glucosidase; herbal tea; kombucha; Rhizophora mucronata.

Resumen

Contexto: Se informa que la kombucha del té es beneficiosa para la salud. Además, puede usarse como un agente hepatoprotector, antiproliferativo, antimicrobiano, antidiabético y antilipidémico y es capaz de curar úlceras estomacales. Pero no se ha estudiado la kombucha de otras hierbas, incluida la kombucha de la fruta del mangle (Rhizophora mucronata).

Objetivos: Evaluar las características y el potencial antidiabético del té de hierbas kombucha de la fruta de R. mucronata con base en análisis in vitro, químicos y físicos.

Métodos: Este estudio se realizó mediante un método experimental utilizando té de hierbas de R. mucronata como bebida de kombucha con diferentes concentraciones de azúcar (10, 20, 30%) y tiempo de fermentación (7, 14, 21 días) con tres repeticiones en cada experimento. Los parámetros analizados fueron la inhibición de la enzima α-glucosidasa para la actividad antidiabética, fenoles totales, ácidos totales y características organolépticas.

Resultados: La concentración de azúcar y el tiempo de fermentación afectaron significativamente las características de la kombucha producida en la inhibición de la α-glucosidasa. El tratamiento óptimo en la inhibición fue a una concentración de azúcar del 10% y 14 días de tiempo de fermentación con IC50 de 33,95 ppm. La kombucha de la fruta de R. mucronata tuvo un pH de 3.11 y contenía un contenido de fenoles totales de 19.679,82 mg GAE/100g, 0,52% del ácido total, y fue muy preferida por los panelistas.

Conclusiones: La kombucha del té de hierbas de la fruta de R. mucronata tiene el potencial de ser una bebida antidiabética con un valor de CI50 más bajo que el fármaco de acarbosa y la kombucha del té comercial.

Palabras Clave: antidiabético; fruta; a-glucosidasa; té de hierbas; kombucha; Rhizophora mucronata.

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Citation Format: Hardoko, Harisman EK, Puspitasari YE (2020) The kombucha from Rhizophora mucronata Lam. herbal tea: Characteristics and the potential as an antidiabetic beverage. J Pharm Pharmacogn Res 8(5): 410–421.

© 2020 Journal of Pharmacy & Pharmacognosy Research (JPPRes)

Medicinal plants and respiratory diseases in Izarène, Morocco

J Pharm Pharmacogn Res 8(5): 392-409, 2020.

Original Article

Ethnobotanical study of plants used in the treatment of respiratory diseases in a population bordering the forest of Izarène

[Estudio etnobotánico de plantas utilizadas en el tratamiento de enfermedades respiratorias en una población que linda con el bosque de Izarène]

Hicham Orch1*, Lahcen Zidane1, Allal Douira2

1Laboratory of Nutrition, Health and Environment, Department of Biology, UFR: Mycology, Faculty of Sciences, Ibn Tofail University, Kénitra, Morocco.
2Laboratory of Botany and Plant Protection, Department of Biology, Faculty of Sciences, Ibn Tofail University, Kénitra, Morocco.
Abstract

Context: Ethnobotanical surveys among users of medicinal plants have allowed us to inventory the medicinal species used and to safeguard the maximum of information acquired by the local population in traditional phytotherapy.

Aims: To contribute to a better knowledge of the medicinal plants used in the treatment of respiratory diseases, an ethnobotanical study was carried out among the population bordering the Izarène forest.

Methods: Using 480 questionnaire sheets, ethnobotanical field surveys were conducted during two campaigns (2013 to 2015). The determination of the different survey media was carried out using stratified probability sampling techniques. The ethnobotanical data were analyzed through the calculation of quantitative indices, such as Relative Frequency of Citation (RFC), Family Importance Value index (FIV), Fidelity Level (FL), Informant Consensus Factor (ICF) and Use-Value of the Plant Part (PPV).

Results: Analysis of the results revealed 40 plant species, which fall into 19 botanical families. The Lamiaceae family was the most represented (14 species, FIV = 0.076). The highest Relative Citation Frequency (RFC) (0.22) was recorded for Mentha pulegium. Concerning the diseases treated, asthma had the highest ICF (0.95). The leaf was considered the most used part of the plant (PPV = 0.34), and most of the remedies were prepared as decoctions.

Conclusions: The results obtained could constitute a basis for further studies for the valorization of medicinal plants used against respiratory diseases through biological and phytochemical studies of the inventoried plants.

Keywords: ethnobotanical surveys; Izarène forest; medicinal plants; respiratory diseases.

Resumen

Contexto: Las encuestas etnobotánicas entre los usuarios de plantas medicinales nos han permitido hacer un inventario de las especies medicinales utilizadas y salvaguardar el máximo de información adquirida por la población local en la fitoterapia tradicional.

Objetivos: Contribuir a un mejor conocimiento de las plantas medicinales utilizadas en el tratamiento de enfermedades respiratorias, se realizó un estudio etnobotánico entre la población que limita con el bosque de Izarène.

Métodos: Utilizando 480 hojas de cuestionarios, se realizaron encuestas de campo etnobotánicas durante dos campañas (2013 a 2015). La determinación de los diferentes medios de encuesta se realizó utilizando técnicas de muestreo de probabilidad estratificadas. Los datos etnobotánicos se analizaron mediante el cálculo de índices cuantitativos, como la frecuencia relativa de citas (RFC), el índice del valor de importancia familiar (FIV), el nivel de fidelidad (FL), el factor de consenso informante (ICF) y el valor de uso de la parte de la planta (PPV).

Resultados: El análisis de los resultados reveló 40 especies de plantas, que se dividieron en 19 familias botánicas. La familia Lamiaceae fue la más representada (14 especies, FIV = 0,076). La frecuencia de cita relativa más alta (RFC) (0,22) se registró para Mentha pulegium. Con respecto a las enfermedades tratadas, el asma tuvo la ICF más alta (0,95). La hoja se consideró la parte más utilizada de la planta (PPV = 0,34), y la mayoría de los remedios se prepararon como decocciones.

Conclusiones: Los resultados obtenidos podrían constituir una base para futuros estudios para la valorización de plantas medicinales utilizadas contra enfermedades respiratorias a través de estudios biológicos y fitoquímicos de las plantas inventariadas.

Palabras Clave: bosque de Izarène; enfermedades respiratorias; estudios etnobotánicos; plantas medicinales.

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Citation Format: Orch H, Zidane L, Douira A (2020) Ethnobotanical study of plants used in the treatment of respiratory diseases in a population bordering the forest of Izarène. J Pharm Pharmacogn Res 8(5): 392–409.

© 2020 Journal of Pharmacy & Pharmacognosy Research (JPPRes)