Category Archives: Validation

HPLC/MS analysis of ethylenediaminetetraacetic acid

J Pharm Pharmacogn Res 8(4): 299-307, 2020.

Original Article

Rapid qualitative and quantitative HPLC/MS analysis of ethylenediaminetetraacetic acid in a pharmaceutical product without prior sample preparation

[Rápido análisis cualitativo y cuantitativo por HPLC/MS del ácido etilendiaminotetraacético en un producto farmacéutico sin preparación previa de la muestra]

Stanislav V. Yefimov*

Pharmetric Laboratory, 11880 28th St N #210, 33716, St. Petersburg, FL, United States of America.
Abstract

Context: Sodium calcium ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) is used to bind metal ions in the practice of chelation therapy, such as treating mercury and lead poisoning. This therapy is used to treat the complication of repeated blood transfusions, as would be applied to treat thalassemia. The work is devoted to the analysis of EDTA in pharmaceutical products.

Aims: To develop and validate a fast method for qualitative and quantitative estimation of EDTA in pharmaceutical products without derivatization.

Methods: The Agilent 6125 C SQ LS/MS instrument was used. Mass Spectrometer was chosen to detect EDTA directly without derivatization and any preliminary sample preparation.

Results: The method was validated in accordance with International Conference on Harmonization guidelines. Total run time was 1.0 min. EDTA was eluted with a retention time of 0.23 ± 0.01 min. The limit of detection was 0.09 μg EDTA. Recovery varied from 100 to 113% and the relative standard deviation varied from 0 to 6%. In positive Electrospray ionization mode, the spectra showed the predominant signals at m/z of 293.2 which corresponds to cation (EDTAH+) and 315.2, which corresponds to cation (EDTANa+).

Conclusions: The developed HPLC/MS method for the determination of EDTA in pharmaceutical preparations containing various other ingredients, including excipients (NaOH and benzyl alcohol), was validated for linearity, accuracy/recovery, precision and selectivity, as well as low detection limit and quantification. The method provides a fast, simple, sensitive and reproducible means of determining the pharmaceutical compositions of EDTA without derivatization and prior sample preparation.

Keywords: EDTA disodium; LC/MS; RP-HPLC; validation.

Resumen

Contexto: El ácido etilendiaminotetraacético de sodio y calcio (EDTA) se usa para unir iones metálicos en la práctica de la terapia de quelación, como el tratamiento del envenenamiento por mercurio y plomo. Esta terapia se usa para tratar las complicaciones de las transfusiones de sangre repetidas, como se aplicaría para tratar la talasemia. El trabajo está dedicado al análisis de EDTA en productos farmacéuticos.

Objetivos: Desarrollar y validar un método rápido para la estimación cualitativa y cuantitativa del ácido etilendiaminotetraacético en productos farmacéuticos sin derivatización.

Métodos: Se utilizó el instrumento Agilent 6125 C SQ LS/MS. Se eligió el espectrómetro de masas para detectar EDTA directamente sin derivatización y cualquier preparación de muestra preliminar.

Resultados: El método fue validado de acuerdo con las pautas de la Conferencia Internacional sobre Armonización. El tiempo total de ejecución fue de 1,0 min. El EDTA se eluyó con un tiempo de retención de 0,23 ± 0,01 min. El límite de detección fue de 0,09 μg de EDTA. La recuperación varió del 100 al 113% y la desviación estándar relativa varió del 0 al 6%. En el modo positivo de ionización por Electrospray, los espectros mostraron las señales predominantes a m/z de 293,2 que corresponde al catión (EDTAH+) y 315,2, que corresponde al catión (EDTANa+).

Conclusiones: El método desarrollado por HPLC/MS para la determinación de EDTA en preparaciones farmacéuticas que contienen varios otros ingredientes, incluidos los excipientes (NaOH y alcohol bencílico), fue validado para linealidad, precisión/recuperación, precisión y selectividad, así como bajo límite de detección y cuantificación. El método proporciona un medio rápido, simple, sensible y reproducible para determinar las composiciones farmacéuticas de EDTA sin derivatización y preparación previa de la muestra.

Palabras Clave: EDTA disódico; LC/MS; RP-HPLC; validación.

Download the PDF file .

Citation Format: Yefimov SV (2020) Rapid qualitative and quantitative HPLC/MS analysis of ethylenediaminetetraacetic acid in a pharmaceutical product without prior sample preparation. J Pharm Pharmacogn Res 8(4): 299–307.

© 2020 Journal of Pharmacy & Pharmacognosy Research (JPPRes)

Determination of rubraxanthone in human plasma

J Pharm Pharmacogn Res 7(5): 381-388, 2019.

Original Article | Artículo Original

Development and validation of UPLC-UV method for the determination of rubraxanthone in human plasma

[Desarrollo y validación del método UPLC-UV para la determinación de rubraxantona en plasma humano]

Meri Susanti1,2, Yahdiana Harahap2, Afrizal Itam3, Dachriyanus1*

1Faculty of Pharmacy, Andalas University, Padang, West Sumatra, 25163, Indonesia.
2Faculty of Pharmacy, Universitas Indonesia, Depok, West Java, Indonesia.
3Department of Chemistry, FMIPA, Andalas University, Padang, West Sumatra, 25163, Indonesia.
Abstract

Context: Rubraxanthone has potential health benefits, such as antioxidant, anti-bacterial and cytotoxic agent. A sensitive method is required to quantify plasma concentrations to assess its efficacy.

Aims: To develop and validate an analytical method for the determination rubraxanthone in human plasma using ultra-performance liquid chromatography (UPLC-UV) for pharmacokinetic application.

Methods: Chromatographic separation was performed aced using a C18 column (100 mm × 3.0 mm, particle size 1.8 μm) with a mobile phase consisting of acetonitrile – 0.4% formic acid (75:25, v/v). The isocratic flow rate was 0.3 mL/min with elution time for rubraxanthone was approximately 3 min and UV detection were at 243 nm. Biological sample preparation involved protein precipitation method with acetonitrile. The developed method was validated as EMEA guidelines for its selectivity, linearity, sensitivity, precision, accuracy, recovery and stability.

Results: The method was proven to be linear over a plasma rubraxanthone concentration range of 206 to 6180 ng/mL with a mean correlation coefficient of 0.999. The within-run and between-run precision (coefficient of variation) were less than 4.7%. The mean recovery of rubraxanthone from human plasma was found to be greater than 95%. The lower limits of quantitation of the method was determined to be 206 ng/mL. The samples remained stable during the processing and analysis times and also during the three freeze/thaw cycles.

Conclusions: The UPLC-UV method was validated for all of the criteria that were necessary for a bioanalytical method and could reliably quantitate rubraxanthone in human plasma for future clinical pharmacokinetic study.

Keywords: bioanalysis; rubraxanthone; UPLC; validation.

Resumen

Contexto: Rubraxanthone tiene beneficios potenciales para la salud, como agente antioxidante, antibacteriano y citotóxico. Se requiere un método sensible para cuantificar las concentraciones plasmáticas para evaluar su eficacia.

Objetivos: Desarrollar y validar un método analítico para la determinación de rubraxantona en plasma humano utilizando cromatografía líquida de ultra alto rendimiento (UPLC-UV) para aplicación farmacocinética.

Métodos: La separación cromatográfica se realizó con una columna C18 (100 mm x 3,0 mm, tamaño de partícula 1,8 μm) con una fase móvil de acetonitrilo – 0,4% de ácido fórmico (75:25, v/v). La velocidad de flujo isocrático fue de 0,3 mL/min con un tiempo de elución para rubraxantona de aproximadamente 3 minutos y la detección UV fue a 243 nm. La preparación de la muestra biológica incluyó el método de precipitación de proteínas con acetonitrilo. El método desarrollado fue validado mediante pautas EMEA por su selectividad, linealidad, sensibilidad, precisión, exactitud, recuperación y estabilidad.

Resultados: Se demostró que el método fue lineal en un rango de concentración de rubraxantona en plasma de 206 a 6180 ng/mL con un coeficiente de correlación medio de 0,999. La precisión dentro del ciclo y entre ciclos (coeficiente de variación) fue inferior al 4,7%. Se encontró que la recuperación media de rubraxantona del plasma humano fue superior al 95%. Se determinó que los límites inferiores de cuantificación del método eran 206 ng/mL. Las muestras permanecieron estables durante los tiempos de procesamiento y análisis y también durante los tres ciclos de congelación/descongelación.

Conclusiones: El método UPLC-UV fue validado para todos los criterios necesarios para un método bioanalítico y podría cuantificar de manera confiable la rubraxantona en plasma humano para futuros estudios clínicos farmacocinéticos.

Palabras Clave: bioanálisis; rubraxantona; UPLC; validación.

Download the PDF file .

Citation Format: Susanti M, Harahap Y, Itam A, Dachriyanus (2019) Development and validation of UPLC-UV method for the determination of rubraxanthone in human plasma. J Pharm Pharmacogn Res 7(5): 381–388.

© 2019 Journal of Pharmacy & Pharmacognosy Research (JPPRes)

Cuantificación de fructooligosacáridos en helado prebiótico

J Pharm Pharmacogn Res 6(2): 108-116, 2018.

Original Article | Artículo Original

Desarrollo y validación de un método para la cuantificación de fructooligosacáridos en un helado prebiótico

[Development and validation of a method for the quantification of fructooligosaccharides in a prebiotic ice cream]

Claudia L. González-Aguirre1, Juan S. Ramírez-Navas1,2*

1Grupo GIEMA, Programa de Química, Universidad Santiago de Cali, Campus Pampalinda, Calle 5 con Carrera 62. Santiago de Cali, Colombia.
2Grupo GIPAB, Escuela de Ingeniería de Alimentos, Universidad del Valle. Ciudad Universitaria Meléndez, Calle 13 # 100-00, Espacio 338. Santiago de Cali, Colombia.

*E-mail: juan.sebastian.ramirez@correounivalle.edu.co

Abstract

Context: Fructooligosaccharides (FOS) are known as oligofructanes, oligosaccharides or oligofructose, which fall within the concept of prebiotics. One of the methods most commonly used in the industry for quantification and quality control nutraceutical substances classification is the method of high performance liquid chromatography (HPLC).

Aims: To develop a procedure for the determination of FOS by HPLC in raw materials and a prebiotic ice cream.

Methods: For the chromatographic separation, an HPLC was used with a refractive index detector (IR). The separation was performed using two columns coupled Sugar-pak I™ using an isocratic procedure with water type 1 at 0.35 mL/min. Kestose (GF2), nistose (GF3) and fructofuranosylnystose (GF4) were used as standards. Robustness was assessed by applying the Youden and Steiner test.

Results: Good linear correlations were obtained (y = 14191.4470 x + 285684.2, r2 = 0.9904) within the concentration range of 8.0-12.0 mg/mL. The FOS recoveries were 99.5% with the intra-day and inter-day relative standard deviation (RSD) less than 0.8%. The robustness test showed that the temperature parameters of the column and flow velocity are critical factors in the method.

Conclusions: This reliable, simple and cost-effective method could be applied to the routine monitoring of FOS (GF2, GF3, and GF4) in raw materials and prebiotic ice creams.

Keywords: fructofuranosylnystose; ice cream; kestose; nystose; prebiotic; refractive index.

Resumen

Contexto: Los fructooligosacáridos (FOS) se conocen como oligofructanos u oligofructosa, clasificados como prebióticos. Uno de los métodos más empleados en la industria para la cuantificación y control de calidad de sustancias nutracéuticas es el método de cromatografía líquida de alta resolución (CLAR).

Objetivos: Desarrollar un procedimiento eficaz para la determinación de FOS por CLAR en materias primas y un helado prebiótico.

Métodos: Para la separación cromatográfica se empleó un CLAR con detector de índice de refracción (IR). La separación se realizó empleando dos columnas acopladas Sugar-pak I™ usando un procedimiento isocrático con agua tipo 1 a 0,35 mL/min. Como estándares se emplearon kestosa (GF2), nistosa (GF3) y fructofuranosilnistosa (GF4). La robustez se evaluó aplicando el test de Youden y Steiner.

Resultados: Se lograron buenas correlaciones lineales (y = 14191,4470 x + 285684,2, r2 = 0,9904) dentro del rango de concentración de 8,0-12,0 mg/mL. Las recuperaciones de FOS fueron del 99.5% con desviación estándar relativa intradía e interdía (RSD) menor al 0,8%. El test de robustez demostró que los parámetros de temperatura de la columna y velocidad de flujo son factores críticos en el método.

Conclusiones: Este método confiable, simple y rentable podría aplicarse al monitoreo rutinario de FOS (GF2, GF3 y GF4) en materias primas y helados prebióticos.

Palabras Clave: fructofuranosilnistosa; helado; índice de refracción; kestosa; nistosa; prebiótico.

Download the PDF file .

 

Citation Format: González-Aguirre CL, Ramírez-Navas JS (2018) Desarrollo y validación de un método para la cuantificación de fructooligosacáridos en un helado prebiótico [Development and validation of a method for the quantification of fructooligosaccharides in a prebiotic ice cream]. J Pharm Pharmacogn Res 6(2): 108–116.

© 2018 Journal of Pharmacy & Pharmacognosy Research (JPPRes)

HPTLC method for quantification of hydrocarbons from Cissus quadrangularis

J Pharm Pharmacogn Res 4(4): 159-164, 2016.

Original Article | Artículo Original

A novel high-performance thin layer chromatography method for quantification of long chain aliphatic hydrocarbons from Cissus quadrangularis

[Nuevo método de cromatografía en capa fina de alta resolución para cuantificar hidrocarburos alifáticos de cadena larga de Cissus quadrangularis]

Vandana Jain1, Vedang Kinjawadekar1, Kirti Laddha2

1Oriental College of Pharmacy, Sanpada, Navi Mumbai 400705, India.
2Medicinal Natural Product Research Laboratory, Pharmaceutical Division, Institute of Chemical Technology, Matunga (E), Mumbai 400 019, India.

*E-mail: jainvandana48@gmail.com

Abstract

Context: A high-performance thin layer chromatography (HPTLC) is an analytical technique, which can be used for the determination of constituents or marker components in various parts of the plants. Earlier studies have estimated phytoconstituents from the stem and other aerial plant parts of Cissus quadrangularis Linn. Estimation of hydrocarbons can also be successfully done using HPTLC technique using suitable derivatization.

Aims: To develop and validate a simple and rapid method for the estimation of long chain aliphatic hydrocarbons from the leaves of C. quadrangularis using HPTLC technique.

Methods: Precoated silica gel 60 F254 plates were used as stationary phase. The mobile phase used was hexane (100 %). The detection of spots was carried out using berberine sulphate as detecting reagent.

Results: The method was validated in terms of linearity, sensitivity, accuracy, and precision. Linearity range was found to be 2-10 µg/mL, limit of detection 0.127 µg/mL, and limit of quantification 0.384 µg/mL.

Conclusions: A novel, simple, accurate, precise and sensitive HPTLC method has been developed and validated for the estimation of long chain aliphatic hydrocarbons obtained from the leaves of C. quadrangularis Linn.

Keywords: Berberine sulphate; high-performance thin layer chromatography; long chain aliphatic hydrocarbons.

Resumen

Contexto: La cromatografía en capa fina de alto resolución (HPTLC) es una técnica analítica que puede ser utilizada para la determinación de los constituyentes o marcadores en varias partes de las plantas. Estudios anteriores han estimado fitoconstituyentes del tallo y otras partes aéreas de la planta de Cissus quadrangularis Linn. La estimación de hidrocarburos también se puede realizar con éxito mediante esta técnica utilizando una derivatización adecuada.

Objetivos: Desarrollar y validar un método sencillo y rápido para la estimación de los hidrocarburos alifáticos de cadena larga de las hojas de C. quadrangularis utilizando la técnica de HPTLC.

Métodos: Placas recubiertas de sílica gel 60 F254 fueron utilizadas como fase estacionaria. La fase móvil fue hexano (100%). La detección de las manchas se realizó mediante sulfato de berberina como reactivo de detección.

Resultados: El método fue validado en términos de linealidad, sensibilidad, exactitud y precisión. Se encontró un rango de linealidad de 2-10 µg/mL, límite de detección 0.127 µg/mL y límite de cuantificación 0.384 µg/mL.

Conclusiones: Un nuevo método de HPTLC simple, exacto, preciso y sensible se ha desarrollado y validado para la estimación de hidrocarburos alifáticos de cadena larga obtenidos de las hojas de C. quadrangularis Linn.

Palabras Clave: Cromatografía en capa fina de alta resolución; hidrocarburos alifáticos de cadena larga; sulfato de berberina.

 

Download the PDF file .

Citation Format: Vandana Jain, Vedang Kinjawadekar, Kirti Laddha (2016) A novel high-performance thin layer chromatography method for quantification of long chain aliphatic hydrocarbons from Cissus quadrangularis. J Pharm Pharmacogn Res 4(4): 159-164.

© 2016 Journal of Pharmacy & Pharmacognosy Research (JPPRes)

HPTLC analysis of MDMA pills

J Pharm Pharmacogn Res 3(6): 162-170, 2015.

Original Article | Artículo Original

High Performance Thin Layer Chromatography method for analysis of 3,4-methylenedioxymethamphetamine in seized tablets

[Método de análisis de 3,4-metilendioximetanfetamina por Cromatografía Planar de Alta Eficiencia en comprimidos incautados]

Boris E. Duffau1, Sonia Rojas1, Lorena A. Delgado2, Sebastián Jofré1

1Sección Análisis de Drogas, Instituto de Salud Pública de Chile;
2Sección Química de Alimentos, Instituto de Salud Pública de Chile. Avenida Marathon 1000, Santiago, Chile
Abstract

Context: Consumption of synthetic drugs had increased in recent years, used as a recreational drug by young people who presume that consumption of this drug is harmless for health; however clinical studies have shown that this stimulant and its metabolites are toxic. Due to these reasons, chemical analysis of this illicit drug is crucial from the points of view of occupational medicine, toxicology, and law enforcement with the aim of pursuit the traffic of illegal drug.

Aims: Implement and fully validate a rapid and simple method for detection and quantitation of MDMA by High-Performance Thin Layer Chromatography in seized samples.

Methods: With the implemented method was analyzed 12 positive samples seized by Chilean police, to found the concentration of MDMA in ecstasy tablets.

Results: The method was fully validated, the linearity of the method was evaluated by the calibration curve between 51.0 – 510.0 µg/band (R2 0.9977); limit of detection was 12.1 µg per band, and limit of quantitation was 36.8 µg per band. The precision of the method (RSD) was lower than 5.0%. Accuracy was evaluated by determination of the percentage of MDMA recovered by the assay (99.13%), and relative Uncertainty was 6.66%. With this method, it was analyzed real seized samples of MDMA, results showed that all samples contained MDMA and concentration was between 18.15 – 59.84 % w/w.

Conclusions: The method is selective, sensitive, and specific, with possible application in forensic analysis. To the best of our knowledge, this is the first report about concentration of MDMA in ecstasy pills in Chile.

Keywords: 3,4-methylenedioxymethamphetamine; ecstasy; HPTLC; MDMA.

Resumen

Contexto: El consumo de drogas sintéticas se ha incrementado en los últimos años. Estas son utilizadas principalmente por jóvenes quienes asumen que su consumo es inofensivo para la salud; sin embargo, estudios clínicos han demostrado que, particularmente el MDMA y sus metabolitos, son tóxicos. Debido a estas razones, el análisis químico de esta droga ilícita es muy importante desde el punto de vista de la toxicología,  medicina forense y en la aplicación de la ley con el propósito de perseguir el tráfico ilícito de drogas.

Objetivos: Implementar y validar un método rápido y simple para la detección y cuantificación de MDMA por Cromatografía Planar de Alta Eficiencia en muestras incautadas.

Métodos: Con el método implementado se analizaron 12 muestras reales   incautadas por la policía chilena, con el fin de encontrar la concentración de MDMA en comprimidos de éxtasis.

Resultados: El método fue completamente validado, la linealidad del método fue evaluada mediante la curva de calibración entre 51.0 – 510.0 µg/banda (R2 0.9977); el límite de detección fue 12.1 µg por banda y el límite de cuantificación fue 36.8 µg por banda. La precisión del método (RSD) fue menor que el 5.0%. La exactitud fue evaluada mediante la determinación del porcentaje de MDMA recuperado en el ensayo (99.13%), y la incertidumbre relativa fue 6.66%. Con este método se analizaron muestras reales de incautaciones de MDMA, los resultados revelaron que todas las muestras contenían MDMA en el rango de concentración entre 18.15 – 59.84% p/p.

Conclusiones: El método es selectivo, sensible y específico, con aplicaciones posibles en el análisis forense. Según nuestro conocimiento, este es el primer reporte acerca de la concentración de MDMA en comprimidos de éxtasis en Chile.

Palabras Clave: 3,4-metilendioximetanfetamina; éxtasis; HPTLC; MDMA.

Download the PDF file .

Citation Format: Boris E. Duffau, Sonia Rojas, Lorena A. Delgado, Sebastián Jofré (2015) High performance thin layer chromatography method for analysis of 3,4-methylenedioxymethamphetamine in seized tablets. J Pharm Pharmacogn Res 3(6): 162-170.
This article has been cited by:
Pereira LSA, Lisboa FLC, Neto JC, Valladão FN, Sena MM (2018) Screening method for rapid classification of psychoactive substances in illicit tablets using mid infrared spectroscopy and PLS-DA. Forensic Science International 288227-235.  DOI: 10.1016/j.forsciint.2018.05.001
Duffau BE, Laurie RC, Rojas S, Rocha R (2016) Analysis of Bromo-DragonFLY by high-performance thin-layer chromatography. Journal of Planar Chromatography-Modern TLC 29(5): 394-396. DOI: 10.1556/1006.2016.29.5.12

© 2015 Journal of Pharmacy & Pharmacognosy Research (JPPRes)

C 003: INTERNATIONAL VALIDATION AND REGULATORY ACCEPTANCE OF ALTERNATIVE METHODS: PROGRESSES AND PROSPECTS

J Pharm Pharmacogn Res 2(Suppl. 1): S13, 2014

Special supplement with the abstract book of LATINFARMA 2013

Conference

C 003: INTERNATIONAL VALIDATION AND REGULATORY ACCEPTANCE OF ALTERNATIVE METHODS: PROGRESSES AND PROSPECTS

Eskes C.

ESTIV, Switzerland.
Abstract

The last years have been marked by the validation and acceptance of a number of regulatory in vitro alternative methods to animal testing adopted at international level such as by the OECD program on Test Guidelines. One of the contributing drivers is certainly the strong requests from the European Union, where the legislation on cosmetics prohibited the testing of finished cosmetic products and their ingredients on animals as well as the marketing within the European Union of cosmetics products tested or containing ingredients tested on animals. In addition to cosmetics, the European Union Regulation on new and existing Chemicals (REACH) also emphasizes the use of alternative methods, requiring the use of animal testing only as a last resort, and establishes several rules where hazard identification might be carried out using alternative methods to animal testing. In order for alternative methods to gain international regulatory acceptance, they generally need to undergo a process of independent scientific validation. In the last years, several in vitro test methods have been validated and adopted at a regulatory level in the areas of ocular and dermal hazard identification for either the full or the partial replacement of the animal test. In particular the adoption of full replacement in vitro methods is leading to new approaches of chemical safety assessment with no animal data. These new approaches bring in turn a number of questions related to the application of alternative methods for specific purposes and their possible combination in test strategies. The latest progress achieved in the formal validation, regulatory acceptance and application of alternative methods will be presented, as well as the new challenges that safety assessors and regulators may need to face regarding the regulatory application of alternative test methods.